簡(jiǎn)介

rProtein A Seplife Suno/Suni是藍(lán)曉科技應(yīng)對(duì)抗體客戶需求推出的Protein A親和層析填料，以球形，高交聯(lián)瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，通過(guò)自主創(chuàng)新技術(shù)將耐堿性重組蛋白A鍵合到該基質(zhì)上。可以特異性地與抗體的Fc區(qū)結(jié)合，用于抗體（單抗和多抗）的分離純化，只需一步親和層析，即可從腹水、血清或培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體。

使用設(shè)備及試劑

（1）使用設(shè)備：蛋白純化系統(tǒng)；

（2）填料：rProtein A Seplife Suni/Suno，裝柱體積1ml；

（3）批次：20211207201/20211208201；

（4）樣品：人免疫球蛋白IgG，上樣量根據(jù)實(shí)際情況而定，C=2mg/ml；

（5）流動(dòng)相A1：20mM PBS+0.15M NaCl，pH7.4；

流動(dòng)相B：0.1M檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，pH3.0；

實(shí)驗(yàn)過(guò)程

DBC測(cè)試(不同駐留時(shí)間)

使用 AKTA pure層析系統(tǒng)編程進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，設(shè)定檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，deltaCp為0.3MPa，將層析柱接入系統(tǒng)，設(shè)定流速為1.0ml/min，用流動(dòng)相B淋洗10cv，用流動(dòng)相A1平衡15cv；上樣流速分別設(shè)置為0.33ml/min，0.25ml/min，0.2ml/min，0.16ml/min（駐留時(shí)間分別對(duì)應(yīng)3min，4min，5min，6min），上樣至280nm處吸收值為90 mAu；設(shè)定梯度洗脫流動(dòng)相100%B，流速1.0ml/min，洗脫至基線平，收集洗脫液；最后，使用流動(dòng)相A1再生10ml，流速1.0ml/min。

評(píng)價(jià)結(jié)果——不同駐留時(shí)間下載量及耐堿性

對(duì)藍(lán)曉兩款填料分別測(cè)試了不同駐留時(shí)間下的動(dòng)態(tài)載量，結(jié)果如下：

表1 藍(lán)曉rProtein A Seplife Suni及Suno不同駐留時(shí)間下動(dòng)態(tài)載量測(cè)試結(jié)果

圖1 藍(lán)曉rProtein A Seplife Suni不同駐留時(shí)間下動(dòng)態(tài)載量測(cè)試結(jié)果

圖2 藍(lán)曉rProtein A Seplife Suno不同駐留時(shí)間下動(dòng)態(tài)載量測(cè)試結(jié)果

圖3 藍(lán)曉rProtein A Seplife Suni及Suno不同駐留時(shí)間下動(dòng)態(tài)載量測(cè)試結(jié)果

（1）同期動(dòng)態(tài)載量用液相ProAqa Excel抗體親和分析色譜柱測(cè)定

（2）一般要求動(dòng)態(tài)載量至少還有初始的70%以上

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.由上述結(jié)果可以看出，在不同保留時(shí)間下，藍(lán)曉兩款rProtein A填料的DBC（動(dòng)態(tài)結(jié)合能力）數(shù)值都隨著駐留時(shí)間增加而增加，其中，5min的駐留時(shí)間與6min差異不大。

2.從上述結(jié)果來(lái)看，本次試驗(yàn)中藍(lán)曉r-Protein A Seplife Suni在經(jīng)過(guò)100次0.5M NaOH循環(huán)后，動(dòng)態(tài)載量還保持在初始的70%以上，耐堿性明顯高于外樣。