Seplife? Oligo dT(20)是一種親和層析填料，專(zhuān)門(mén)用于從復(fù)雜體系中捕獲信使 RNA (mRNA)，從而提高其純度。高度交聯(lián)的苯乙烯/二乙烯基苯 (DVB)基質(zhì)提供剛性多孔基質(zhì)，在其上進(jìn)行親水改造，用(dT)基團(tuán)進(jìn)行功能化。

親水改造的作用是最大限度地減少非特異性相互作用，而功能基團(tuán)poly(DT)則通過(guò)堿基配對(duì)與mRNA的polyA尾特異性相互作用。

Seplife? Oligo dT(20) 具有以下特性：

◆粒度分布均勻，為50微米。

◆高載量

◆高耐鹽、耐壓性能

◆pH范圍穩(wěn)定性

◆在各種溫度范圍內(nèi)保持穩(wěn)定

◆在標(biāo)準(zhǔn)純化條件下有效捕獲和釋放mRNA

Seplife?Oligo dT（20）是一種平均粒徑為50微米的親和色譜樹(shù)脂，專(zhuān)為從復(fù)雜混合物中高效捕獲mRNA而設(shè)計(jì)。

技術(shù)指標(biāo)

使用方法

3.1裝柱方法

應(yīng)按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行柱填充。確保每種材料都處于其工作溫度非常重要。

Seplife? Oligo dT(20)填料以裝在20%乙醇溶液中提供。為了確定填充指定層析柱所需的填料體積，必須確定或考慮漿液濃度和壓縮系數(shù)。Seplife? Oligo dT(20) 填料的壓縮系數(shù)為 1.12 ；壓縮系數(shù)由重力沉降體積與填料床體積之比確定。

可采用兩種裝柱程序：恒壓裝柱和恒流裝柱。

3.2平衡

使用約5CV的適當(dāng)緩沖液平衡柱。確保流出液的電導(dǎo)率和 pH 值與平衡緩沖液完全相同。平衡溶液可以是中性pH緩沖液，例如Tris或磷酸鹽緩沖液，例如10mM Tris-HCl、0.5M NaCl、1mM EDTA (pH 7.4) 。高電導(dǎo)率可促進(jìn)填料上的poly DT與mRNA分子的poly A 之間的親和相互作用，因此通常使用至少0.2 -0.5M的NaCl 濃度。平衡緩沖液應(yīng)具有合適的電導(dǎo)率以促進(jìn) mRNA 結(jié)合。

3.3樣品制備

mRNA樣品應(yīng)在與平衡緩沖液相似的緩沖液中制備，且緩沖液的電導(dǎo)率要適宜。如果RNA 樣品需要變性，則將樣品在65-70 oC下加熱10-15分鐘，然后立即放入冰浴中。這種處理有助于破壞二級(jí)結(jié)構(gòu)，并可能提高純化性能。

mRNA的大小和結(jié)構(gòu)可能有很大差異，這會(huì)影響其與 Seplife? Oligo dT(20)的結(jié)合能力。樣品溶解度、濃度、雜質(zhì)分布以及緩沖液成分會(huì)影響與 Seplife? Oligo dT(20) 的結(jié)合能力，因此應(yīng)進(jìn)行優(yōu)化。通常，樣品應(yīng)用的保留時(shí)間至少為3分鐘。

確保樣品經(jīng)過(guò)過(guò)濾（0.22μm 或 0.45μm 過(guò)濾器），并且如果可能的話(huà)，在加入層析柱之前進(jìn)行脫氣。

完成上樣后，用平衡緩沖液（2-3CV）和優(yōu)化的低電導(dǎo)率緩沖液沖洗層析柱，以改善雜質(zhì)去除。例如，可以應(yīng)用10mM Tris-HCl、0. 2 M NaCl、1mM EDTA（pH 7.4）溶液 3-5CV，以促進(jìn)在樣品洗脫前去除雜質(zhì)。

3.4洗脫

在電導(dǎo)率降低時(shí)，polyA和polyT之間會(huì)發(fā)生靜電排斥，導(dǎo)致兩者分離。從Seplife? Oligo dT(20)層析填料洗脫mRNA時(shí)遵循此原理。降低緩沖液中的鹽濃度甚至使用水都會(huì)導(dǎo)致 mRNA 洗脫。例如，10mM Tris-HCl、1mM EDTA（pH 7.4）3-5CV溶液或使用3-5CV水進(jìn)行樣品洗脫。應(yīng)優(yōu)化洗脫條件，以確保應(yīng)用最佳條件以實(shí)現(xiàn)高純度和 mRNA 回收率。

可以通過(guò)加熱洗脫緩沖液或?qū)⑾疵撝訜嶂?5 o C來(lái)增強(qiáng)洗脫。

3.5再生

Seplife? Oligo dT(20)色譜填料應(yīng)根據(jù)污染嚴(yán)重程度用3-5CV水或20% - 30%乙醇溶液沖洗。再生過(guò)程后應(yīng)進(jìn)行 CIP 和用平衡緩沖液清洗柱或在儲(chǔ)存溶液中平衡。

3.6在位清洗（CIP）

Seplife? Oligo dT(20)色譜填料可用 3-5CV 的 0.1M NaOH 溶液消毒。如果需要更嚴(yán)格的 CIP，則可以使用0.5M NaOH溶液（3-5CV）。

CIP 后，用平衡緩沖液沖洗柱3-5CV。

4.儲(chǔ)存

不立即使用的層析填料應(yīng)儲(chǔ)存在2-8 °C的20%乙醇中。已裝填的填料應(yīng)儲(chǔ)存在 2-8 °C 的 20% 乙醇中。請(qǐng)勿冷凍。

使用前，讓散裝介質(zhì)和填充柱達(dá)到室溫。

5. 運(yùn)輸

運(yùn)輸過(guò)程中避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品一起運(yùn)輸。

6. 注意事項(xiàng)

6.1層析柱選擇：理論上只要柱子足夠長(zhǎng)，就能得到理想的分離度，但由于柱子的流速與壓力梯度有關(guān)，柱長(zhǎng)的增加會(huì)使流速變慢，峰形變寬，分離度降低；而隨著柱徑的增加，液流的不均勻性增大，分離度明顯下降。

6.2柱裝填：裝填后的柱床表面必須平整，無(wú)溝流、氣泡，否則應(yīng)重新裝填。

6.3在純化過(guò)程中，必須嚴(yán)格控制洗脫緩沖液的pH值和電導(dǎo)率。在柱層析之前，必須用平衡緩沖液徹底平衡樣品和層析介質(zhì)。

6.4洗脫過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格控制流速，不宜過(guò)快。

6.5在上樣和整個(gè)洗脫過(guò)程中，防止柱表面干燥。

訂購(gòu)信息

生產(chǎn)日期：見(jiàn)標(biāo)簽

使用期限：在適當(dāng)?shù)馁A藏條件下可貯藏5年

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